水中總氮的測(cè)定常用堿性過硫酸鉀消解紫外分光光度法。該方法的優(yōu)點(diǎn)是步驟比較簡(jiǎn)單，所需試劑較少，所需儀器設(shè)備一般實(shí)驗(yàn)室都有。做總氮空白實(shí)驗(yàn)不僅與試劑有關(guān)，還與實(shí)驗(yàn)用水、器具、家用高壓鍋或醫(yī)用便攜式蒸汽滅菌器的壓力、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、方法步驟等因素密切相關(guān)。
1、試劑制備和儲(chǔ)存
堿性過硫酸鉀的制備過程非常重要。如果掌握不好，會(huì)影響消解效果，對(duì)測(cè)定結(jié)果有一定影響。中關(guān)于堿性過硫酸鉀的配制，只是簡(jiǎn)單的說是將過硫酸鉀和氫氧化鈉溶于水，沒有做其他要求。事實(shí)上，過硫酸鉀的溶解速度很慢。要想加速溶解，千萬不能盲目加熱。即使加熱，最好采用水浴加熱方式，水浴溫度必須低于60℃，否則過硫酸鉀會(huì)分解失效。配制溶液時(shí)，可分別稱取過硫酸鉀和氫氧化鈉，兩者分別配制，然后混合定容，或先配制氫氧化鈉溶液，待溫度降至室溫后加入過硫酸鉀至溶解。若二者在燒杯中溶于水，則應(yīng)緩慢加水，同時(shí)攪拌，防止氫氧化鈉放熱，使溶液溫度過高，造成局部過硫酸鉀失效。
過硫酸鉀的貯存也應(yīng)注意。應(yīng)避免與還原性物質(zhì)、硫、磷等混儲(chǔ)。此外，過硫酸鉀易吸濕放出氧氣。因此，為防止發(fā)生故障，應(yīng)將其放置在干燥的試劑柜中。
2、無氨水的制備
實(shí)驗(yàn)過程對(duì)水的要求非常嚴(yán)格，普通的蒸餾水往往達(dá)不到實(shí)驗(yàn)要求。這時(shí)就需要進(jìn)行二次處理，得到無氨水。用蒸餾法制備無氨水時(shí)規(guī)定：“棄去前50ml餾出液，再將餾出液收集于帶玻璃塞的玻璃瓶中”。
3、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境
總氮的分析應(yīng)在無氨的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境中進(jìn)行。室內(nèi)不應(yīng)有灰塵、石油和其他含氮化合物。對(duì)于本項(xiàng)目實(shí)驗(yàn)室的總氮項(xiàng)目分析，所用試劑和玻璃器皿也應(yīng)分開存放，避免交叉污染，影響空白值。
4、玻璃器皿的清洗
所用玻璃器皿應(yīng)先用（1+9）鹽酸浸泡，再用無氨水漂洗數(shù)次后再使用，否則也會(huì)造成空白值偏高或平行度較高的不良情況。
5、消化溫度和壓力的控制
對(duì)于使用醫(yī)用便攜式蒸汽滅菌器的實(shí)驗(yàn)室，由于實(shí)測(cè)壓力為1.1~1.4kg/cm2，溫度為120℃~124℃，此時(shí)可加裝穩(wěn)壓器，將壓力控制在該范圍內(nèi)，從而節(jié)省免去手動(dòng)切斷電源控制的麻煩，穩(wěn)定省力。
六、比色法注意事項(xiàng)
本項(xiàng)目的測(cè)量涉及兩個(gè)波長（220nm和275nm），有條件的實(shí)驗(yàn)室可以使用雙光路紫外分光光度計(jì)，優(yōu)點(diǎn)是方便快捷，可以避免反復(fù)調(diào)整波長產(chǎn)生測(cè)量誤差，并且菜肴錯(cuò)誤也可以自動(dòng)糾正。如果沒有雙光路光度計(jì)，建議在測(cè)量一組樣品的相同波長后，調(diào)整到另一個(gè)波長進(jìn)行統(tǒng)一測(cè)量。一個(gè)樣品測(cè)完兩個(gè)吸光度后不要換另一個(gè)樣品，重復(fù)調(diào)整波長。會(huì)造成一定的測(cè)量誤差。
七、試劑選擇
過硫酸鉀是堿性過硫酸鉀消解和紫外分光光度法測(cè)定總氮過程中的關(guān)鍵試劑。首先，試劑的純度關(guān)系到空白值的高低和測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性。一般分析純過硫酸鉀的總氮含量最高不超過0.005%。但由于試劑質(zhì)量差異，部分廠家和試劑批次往往達(dá)不到這一要求，導(dǎo)致空白值偏高。此外，雖然分析純氫氧化鈉的含氮量遠(yuǎn)低于過硫酸鉀，但應(yīng)慎重選擇。筆者在工作中曾遇到過過硫酸鉀溶液和氫氧化鈉溶液混合成堿性過硫酸鉀溶液時(shí)，散發(fā)出氨水氣味的現(xiàn)象，這說明試劑的純度不夠。因此，如果條件允許，建議使用優(yōu)級(jí)純或參比試劑，盡量減少試劑中的濃度。氮含量，從而降低實(shí)驗(yàn)空白值。
8、實(shí)驗(yàn)用水和試劑的質(zhì)量檢驗(yàn)
如果實(shí)驗(yàn)空白值不理想，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)用水和試劑進(jìn)行檢測(cè)，選擇含氮量最低的水和試劑，以獲得理想的空白值。筆者的經(jīng)驗(yàn)是，每次換一種水，每次換廠家，換一批次的過硫酸鉀和氫氧化鈉試劑，做全過程的總氮會(huì)很麻煩，而且往往很難得到最終的總氮。綜上所述。下面總結(jié)的簡(jiǎn)單方法，僅供參考。
8.1 水質(zhì)檢驗(yàn)：將所有待選實(shí)驗(yàn)水放入石英比色皿中，分別在220nm和275nm波長處測(cè)量其吸光度，并根據(jù)A220nm-2A275nm校正吸光度，使校正后的吸光度值最小的水為實(shí)驗(yàn)水。
8.2 試劑檢驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)時(shí)將待測(cè)過硫酸鉀和氫氧化鈉按其在溶液中的含量消解、定容后全部制成相應(yīng)濃度的溶液，以該溶液為試樣，測(cè)定氨的吸光度。氮和硝態(tài)氮，吸光度最低的可以用。如有必要，可進(jìn)一步計(jì)算氮含量。